همسانه‌سازی و بیان ژن نوترکیب CD40Lانسانی در رده سلولی HEK293

چکیده سابقه و هدف CD40L ، پروتئینی غشایی و یکی از اعضای خانواده TNF است که نقش مهمی در انتقال پیام سلولی در ایمنی ذاتی و تطبیقی دارد. از آن جایی‌که این پروتئین نقش خود را از طریق تجمع گیرنده در سطح سلول هدف ایفا می‌کند، به ‌نظر می‌رسد فرم مالتی‌‌مری آن بتواند اثر قوی‌تری نسبت به فرم طبیعی ترایمری ایجاد کند. بر ‌این اساس در این مطالعه کلونینگ و بیان فرم کایمری و دودکامری CD40L محلول، از طریق پروتئین خود مالتی‌مر شونده سورفاکتانت پروتئین  (SP-D) D، در رده سلولی HEK293 مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پروتئین SPD-CD40L به ‌صورت in silico طراحی و در پلاسمید pcDNA3.1(+) همسانه‌سازی شد. سلول‌های HEK293 به عنوان میزبان بیانی مورد استفاده قرار گرفته و ترانسفکت شدند. بیان CD40L نوترکیب در سطح RNA به وسیله RT-PCR بررسی شد. پس‌ از تخلیص پروتئین نوترکیب با روش کروماتوگرافی تمایلی، وزن مولکولی آن توسط SDS-PAGE تعیین گردید. به ‌منظور بررسی اختصاصیت پروتئین نیز از روش‌های ELISA وDot Blot  استفاده شد. یافته‌ها نتایج به دست آمده نشان‌دهنده ترانسفکشن سلول‌های HEK293 و بیان پروتئین نوترکیب پس از 24 و 48 ساعت از زمان ترانسفکشن بود. هم چنین نتایج حاصل از روش ELISA و Dot Blot بیانگر اختصاصیت پروتئین کایمری SPD-CD40L بود.  نتیجه گیری پروتئین کایمری SPD-CD40L از طریق وکتور بیانی pcDNA3.1(+) در رده سلولی یوکاریوتی HEK293 به­طور موفقیت­آمیز بیان شد و وزن مولکولی پروتئین 4-ترایمری(دودکامری) با مقدار مورد انتظار تطابق داشت.